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ELISA免疫測定,你學(xué)會(huì)了嗎?
更新時(shí)間:2020-01-03   點(diǎn)擊次數(shù):771次

ELISA免疫測定,你學(xué)會(huì)了嗎?

 

ELISA**測定目的是?

1.測定體液中的各種蛋白質(zhì),包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等;

2.測定**,包括小分子量的甾體**等;

3.測定***和**;

4.測定病原體抗原,HBsAg、HBeAg等;

5.利用純化的抗原檢測標(biāo)本中的抗體,例如抗-HBs等;

 

ELISA**測定原理

①使抗原(或抗體)結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其**活性;

②使抗原(或抗體)與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo) 抗原(或抗體),而且此酶標(biāo)抗原(或抗體)既保留其**活性,又保留其酶活性;

③測定時(shí)將受檢標(biāo)本(抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng),再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開,結(jié)合 在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成比例;再加入酶反應(yīng)底物后,底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物,根據(jù)其顏色反應(yīng)的 深淺進(jìn)行定性或定量分析,以了解被測標(biāo)本中抗體或抗原含量。

 

ELISA**測定步驟

1. 包被;

2. 加樣:加稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔);

3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘;

5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml;

6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值。

 

引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因

標(biāo)本因素、試劑因素、操作因素。

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